Ионизирующее излучение. Наиболее перспективный способ деконтминации сырья и готовых лекарственных форм. Ионизирующее излучение обладает высокой проникающей способностью. При облучении не образуются канцерогенные, мутагенные, токсичные вещества, сохраняются физико-химические и биологические свойства обрабатываемых лекарств. Метод используют для обработки антибиотиков, витаминов, ферментов, гормонов и алкалоидов.
Стерильные и асептические лекарственные формы.
Стерильные (безмикробные) лекарственные формы готовят в асептических условиях и стерилизуют. К ним относятся растворы для инъекций, глазные капли, препараты для детей до 1 года.
Асептические лекарственные формы готовят в асептических условиях без стерилизации.
Асептика - предупреждение попадания микробов в лекарственный препарат. Асептические и стерильные лекарственные формы готовят в асептических условиях:
1. Требования к помещению.
Помещение называется асептический блок. Уборка в нем производится 1раз в смену с использованием дезинфицирующих растворов (хлорамин Б - 1%, перекись водорода - 3%). Для стерилизации воздуха и поверхностей применяют бактерицидные лампы. Отбор проб для бактериологического исследования (силами центров ГСЭН) различных объектов в аптеках проводится не менее 2 раз в квартал. Пробы воздуха отбирают аспирационным методом с помощью аппарата Кротова Микробное число воздуха в асептическом блоке не должно превышать 500 - 750 до и 1000 МК/м3 после работы, а золотистого стафилококка, плесневых и дрожжевых грибов не должно быть в 250 л воздуха ни до, ни после работы.
2.Требования к аптечной посуде, дистиллированной воде. Они обрабатываются в автоклаве (120 ° - 1атм. - 45 мин. или 132 °- 2 атм. - 20 мин).
3. Требование к персоналу. Персонал работает в стерильной одежде ( халат, шапочка, бахилы, марлевая повязка), обрабатывает руки дезраствором.
4 ( 0,5% р-р хлорамина Б или этанол - 80%). В стерильных лекарственных формах содержание микроорганизмов не допускается, в асептических - допускается не более 10-15 в 1г (мл).
Нормативными документами, регламентирующими санитарный режим аптечных организаций и микробиологический контроль качества лекарственных средств являются:
- «Методические указания по микробиологическому контролю в аптеках», 1985 г.;
- Приказ МЗРФ № 53 от 25.03.94 года "Об усилении контроля качества лекарственных средств";
- Приказ №118 от 14.06.94 года "Об аккредитации региональных (территориальных) контрольно-аналитических лабораторий (центров контроля качества лекарственных средств) и сертификации лекарственных средств в Российской Федерации";
- Приказ № 309 МЗ РФ от 21 октября 1997г. «Об утверждении инструкции по санитарному режиму аптечных организаций (аптек)» (см. придажение№3).
5. Объекты санитарно-бактериологического обследования в
аптеках
В аптеках согласно инструкции, утвержденной приказом Министерства здравоохранения, не менее двух раз в квартал осуществляется бактериологический контроль, объектами которого служат:
· вода дистиллированная;
· инъекционные растворы до и после стерилизации;
· глазные мази после стерилизации;
· глазные капли, приготовленные в асептических условиях на стерильной основе;
· сухие лекарственные вещества, используемые для приготовления инъекционных растворов;
· нестерильные лекарственные формы;
· аптечная посуда, пробки, прокладки, прочие материалы;
· инвентарь, оборудование, руки, санитарная одежда персонала;
· воздух аптечных помещений.
6. Определение микрофлоры в лекарственных формах
При исследовании лекарственных форм осуществляют:
· определение общего микробного числа (микробная обсемененность);
· определение бактерий группы кишечной палочки;
· определение дрожжевых и плесневых грибов;
· определение условно - патогенных и патогенных микроорганизмов.
Общее микробное число (ОМЧ) – количество микроорганизмов, содержащихся в 1 г (мл) препарата, определяют по числу выросших колоний.
Определение микробной обсемененности растительного лекарственного сырья
В асептических условиях (в стерильной чашке Петри, обоженными ножницами и пинцетом) из листа или верхнего слоя корневища вырезают кусочек площадью 1 см2, который помещают в пробирку с 10 мл стерильного физиологического раствора и взбалтывают в течение 5 мин. Из полученного смыва готовят четыре десятикратных разведения (1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000), для посева в связи с большой обсемененностью растительного сырья используют два последних (1: 1000 и 1: 10000) разведения. В стерильную чашку Петри вносят 1 мл смыва, после чего в нее наливают 15 мл расплавленного и остуженного до 450С МПА, перемешивают и после застывания агара посевы инкубируют при 370С 24 - 48 ч. Производят подсчет выросших колоний на поверхности и в глубине агара. Полученное число колоний следует умножить на степень разведения.
Бактериологическое исследование стерильных лекарственных средств
Инъекционные растворы, глазные капли, лекарственные средства для новорожденных, другие лекарственные препараты, стерилизуемые в процессе их изготовления, засевают неразведенными в тиогликолевую среду для определения микробной обсемененности и среду Сабуро для выявления дрожжевых и плесневых грибов. Посевы на тиогликолевой среде выдерживают 14 суток при 370С, на среде Сабуро 14 суток при 240С. Учет результатов посевов проводят по отсутствию видимых изменений в посевах.
Определение микробной обсемененности готовых лекарств
Жидкие лекарственные формы разводят стерильным физиологическим раствором 1:10 (или 1:100) и засевают в объеме 0,5 мл на МПА в чашке Петри. 1г порошка или таблеток помещают в пробирку с 10 мл физиологического раствора и после растворения производят посев на МПА.
Мягкие лекарственные формы (мази, пасты) в количестве 1 г взвешивают в асептических условиях, переносят в пробирки с 10 мл стерильного 1,4% раствора натрия гидрокарбоната для диспергирования, которое производят вращательным движением пробирки между ладонями в течение 2-4 мин., 0,5 мл полученного раствора засевают на МПА в чашках Петри. Чашки с посевами помещают в термостат на 48 ч, затем подсчитывают число колоний и определяют количество бактерий в 1 мл или 1 г образца.
Определение общего количества грибов
Определение общего количества грибов проводят на твердой среде Сабуро, на которую засевают 0,5 мл цельного или разведенного 1:10 препарата. Посевы инкубируют при 240С в течение 5 суток, затем подсчитывают число выросших колоний и определяют количество грибов в 1 мл (1 г) препарата.
Качественное определение условно - патогенных и патогенных микроорганизмов
1. Определение бактерий семейства Enterobacteriaceae (роды Escherichia, Salmonella, Shigella).
Посев лекарственных средств производят на среду Эндо и висмут -сульфитный агар. Идентификацию энтеробактерий осуществляют следующим образом: если в образце обнаружены грамотрицательные неспоровые палочки, дающие отрицательную реакцию на цитохромоксидазу, ферментирующие глюкозу и восстанавливающие нитраты в нитриты, исследуемый препарат содержит бактерии семейства Enterobacteriaceae.
2. Определение патогенных стафилококков.
Определение патогенных стафилококков производят посевом на желточно - солевой агар. На этой среде патогенные стафилококки вызывают расщепление лецитина, проявляющееся в образовании вокруг колоний зоны помутнения с радужным венчиком по периферии. Выделенную чистую культуру исследуют на наличие плазмокоагулазы.
3. Выявление Pseudomonas aeruginosa.
Осуществляют на среде с глицерином. Синегнойная палочка на этой среде образует зеленоватые флуоресцирующие колонии, выделяющие в среду сине - зеленый пигмент.
4. Выявление протея. Производят посевом на МПА по Шукевичу.
Наличие условно - патогенных и патогенных микроорганизмов в лекарственных препаратах недопустимо. В соответствии с требованиями Государственной фармакопеи XI издания приняты следующие критерии оценки микробной обсемененности лекарственных средств (табл. 2)
Таблица 2
Нормативы предельно допустимого содержания
непатогенных микроорганизмов в лекарственных формах
Лекарственные средства
Содержание микроорганизмов в 1 г/мл
Инъекционные растворы перед стерилизацией, не позднее 1,5 ч после приготовления
Не более 30
Инъекционные растворы после стерилизации
Стерильны
Глазные капли, средства для новорожденных
Стерильны
Дистиллированная вода для приготовления стерильных растворов
Не более 15
Препараты для местного применения (на кожу, слизистую носа, гинекологические)
Не более 100, в том числе не более 10 грибов
Пероральные препараты
Не более 1000, в том числе не более 100 грибов
Определение пирогенности
Пирогенность (повышение температуры тела) обусловлена наличием в стерильных лекарственных препаратах продуктов распада бактерий (липополисахаридов). Стерильные инъекционные растворы должны быть апирогенны.
Определение пирогенности проводят на здоровых кроликах обоего пола, не альбиносах, весом 2,5-3,0 кг, содержащихся на полноценном рационе. Испытуемую дистиллированную воду или лекарственные средства вводят трем кроликам в ушную вену в количествах и растворителях, предусмотренных соответствующими инструкциями.
Воду для инъекций и раствор лекарственного средства считают непирогенными если сумма повышений температуры у 3 кроликов меньше или равна 1,40С. Если сумма превышает 2,20С, то испытуемые растворы считают пирогенными. В случаях, когда сумма повышений температуры у 3 кроликов находится в пределах от 1,5 до 2,20С, испытание проводят на 5 кроликах. В этом случае раствор считают непирогенным, если сумма повышений температуры у всех 8 кроликов не превышает 3,70С.
Таблица 3. Требования к микробиологической чистоте
№№
п/п
Наименование
объекта контроля
Требования к микробиологической чистоте
Нормативный
документ
1
Вода очищенная
Не более 100 микроорганизмов в 1 мл при отсутствии Enterobacteriaceae, P.aeruginosa, S.aureus
ФС 42-2619-97
2
Вода для инъекций
Апирогенность
ФС 42-2620-97
3
Инъекционные растворы после стерилизации*
Стерильность
ГФ Х1, вып.2,стр.187
4
Глазные капли после стерилизации
Стерильность
ГФ Х1, вып.2,стр.187
4.1
Глазные капли, приготовленные в асептических условиях на стерильной воде
Стерильность
ГФ Х1, вып.2,стр.187
5
Основное сырье (субстанции) для производства стерильных препаратов
Не более 100 микроорганизмов в мл при отсутствии Enterobacteriaceae, P.aeruginosa, S.aureus
ГФ Х1, вып.2,стр.187
6
Лекарственные средства для новорожденных (растворы для внутреннего и наружного применения, глазные капли, масла для обработки кожных покровов)
Стерильность
Приказ МЗ СССР от 19.10.82 «Об усилении контроля за санитарным состоянием родильных домов, детских лечебно-профилактических учреждений и аптек»
7
Детские лекарственные средства (от 0 до 1 года)
Не более 50 бактерий и грибов в 1г или 1 мл при отсутствии Enterobacteriaceae, P.aeruginosa, S.aureus
Изменение к статье ГФ Х1, вып.2, стр.187
«Методы микробиологического контроля лекаственных средств»(1995г.)
Методические указания по приготовлению стерильных растворов в аптеках (1994г.)
*Интервал времени от начала изготовления раствора до стерилизации не должен превышать 3-х часов.
ИСПОЛЬЗУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА:
1. Интернет
2. Микробиология и иммунология / Под ред.А.А.Воробьева.- М.: Медицина, 2001г.
3. Методические рекомендации «фитопатогенная микрофлора. микробиологические методы исследования лекарственного сырья и готовых лекарственных форм» для студентов фармацевтического факультета по предмету «микробиология» (Омская государственная медицинская академия 2005год)
