В полученном минерализате можно экспресс-методом обнаружить ртуть, медь, цинк и мышьяк.
Для минерализации соляной кислотой и калия хлоратом (бертолетовой солью) берут 20—25 г патматериа-ла в колбу Кьельдаля, заливают соляной кислотой, подогревают и добавляют небольшими порциями калия хромат до тех пор, пока жидкость не станет прозрачной. В минерализате экспресс-методом можно обнаружить свинец и барий.
Отгонку с водяным паром применяют для извлечения синильной кислоты, формальдегида, фенола, некоторых ХОС, ФОС и других веществ.
Перегонный аппарат состоит из парообразователя (круглодонная колба со стеклянной трубкой в пробке), отгонной колбы с двумя трубками в пробке (одна идет почти до дна от парообразователя, другая — короткая соединена с холодильником), водяного холодильника и приемной колбы. Навеску измельченного материала помещают в отгонную колбу, подкисляют виннокаменной или щавелевой кислотой и подключают кипящий парообразователь, после чего начинают подогревать отгонную колбу. Дистиллят собирают в приемную колбу. В первых его порциях можно определять синильную кислоту, в последующих — другие вещества.
Для количественного определения берут точную навеску материала и отгонку продолжают до тех пор, пока перестанет проявляться специфическая качественная реакция на ядовитое вещество. Полученный дистиллят объединяют, замеряют его объем и количественно определяют содержание вещества.
ТЕМА: ОБНАРУЖЕНИЕ ГОССИПОЛА В КОРМАХ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ
Цель занятия: освоить метод определения госсипола в кормах растительного происхождения.
Материальное обеспечение: проба кормов, 0,2 %-ного водного раствора едкого натра, ацетон, стеклянные бусинки, петролейный эфир, 2 %-ного водного раствора серной кислоты, хлороформ.
Принцип метода: метод основан на извлечении из растительного материала в виде госсиполята натрия, очистке экстракта от коэкстрактивных веществ, переводе госсиполята натрия в свободный госсипол, извлечении его хлороформом, отгонке хлороформа с последующим анализом сухого остатка цветной реакцией на госсипол. Количественное определение проводят способом хроматографии в тонком слое.
Ход анализа
5 г измельченной и просеянной через сито пробы переносят в колбу на 250 мл, заливают 80 мл экстрагирующей смеси (70 мл а с 30 мл) и вносят стеклянные бусинки. Колбу закрывают и оставляют на 24 ч в вытяжном шкафу для настаивания при частом взбалтывании, после чего экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку. Содержимое колбы дважды промывают 15—20 мл экстрагирующей смеси и фильтруют. В делительную воронку вносят 20 мл петролейного эфира и перемешивают; после отстаивания нижний слой сливают в химический стакан, а верхний отбрасывают. Очистку нижнего слоя повторяют 3 раза, а при наличии травяной муки — 5—6 раз.
Очищенную экстракционную жидкость переносят в делительную воронку, куда добавляют 50 мл 2 %-ного водного раствора серной кислоты. Смесь выдерживают 15 мин, после чего госсипол трижды переэкстрагируют хлороформом в объеме 15, 10 и 10 мл. Хлороформенный экстракт фильтруют через бумажный фильтр в стеклянный низкий бюкс и ставят для испарения в вытяжной шкаф. Сухой остаток хранят в закрытом бюксе в темном сухом месте. Для исследования сухой остаток растворяют в 1 мл хлороформа.
Качественная реакция обнаружения госсипола.
0,1 мл хлороформенного раствора сухого остатка наносят на полоску хроматографической бумаги (10Х 4 см) с левой стороны, отступая от края 3 см. На расстоянии 3 см от пробы наносят 0,1 мл стандартного госсипола (5 мг госсипола растворяют в 50 мл хлороформа). После высыхания места нанесения растворов проявляют путем проводки через раствор проявителя (20 г флороглюцина, 100 мл этилового спирта, 10 мл концентрированной соляной кислоты). При появлении в исследуемой пробе красного или малинового пятна (как и в стандартном растворе госсипола) дают заключение о наличии госсипола в пробе. В дальнейшем проводят хроматографический анализ.
Тема: ОПРЕДЕЛЕНИЕ НАТРИЯ ХЛОРИДА АРГЕНТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ (МЕТОД МОРА)
Цель занятия: освоить определение натрия хлорида аргентометрическим методом.
Материадьное обеспечение: ацетон, н-гексан, петролейный эфир, бензол, хлороформ или их смеси, спирты, хлороформ, этилацетат, пластинки с тонким слоем сорбента, пробы корма и патматериал.
Принцип метода основан на извлечении натрия хлорида из корма или патматериала дистиллированной водой с последующим титрованием иона хлора раствором нитрата серебра в присутствии хромата калия как индикатора. После связывания иона хлора серебром избыток нитрата серебра реагирует с хроматом калия, образуя хромат серебра красно-кирпичного цвета.
Ход определения: 10 г измельченного корма или патматериала (слизистой оболочки желудка или печени) помещают в мерную колбу на 100 мл, заливают до 3/4 объема водой, хорошо встряхивают и нагревают на водяной бане до 80 °С. Через 30 мин охлаждают до комнатной температуры, периодически встряхивая, доводят водой до метки, встряхивают и фильтруют через складчатый бумажный фильтр в сухой стакан.
Если вытяжка окрашена интенсивно, можно взятую навеску подсушить на водяной бане, затем в тигле обуглить до легко распадающейся золы, количественно перенести в мерную колбу на 100 мл и поступать далее, как описано выше.
20 мл фильтрата переносят в коническую колбу, приливают 1 мл 10 %-ного раствора калия хромата и титруют 0,1 н. раствором нитрата серебра до появления неисчезающего кирпично-красного окрашивания.
Содержание натрия хлорида вычисляют по формуле:
х = а- 0,005844- в1 • 100 ,
св
где X — содержание натрия хлорида, %; а — количество раствора нитрата серебра, пошедшее на титрование, мл; в — объем вытяжки, взятый для титрования, мл; в1 — общий объем вытяжки, мл; с — навеска объекта, г; 0,005844 — количество NaCl (г), связывающегося 1 мл 0,1 н. раствора AgNO3.
Тема: ОПРЕДЕЛЕНИЕ АММИАКА В СОДЕРЖИМОМ РУБЦА МИКРОДИФФУЗИОННЫМ МЕТОДОМ
Цель занятия: освоить определение аммиака в содержимом рубца микродиффузионным методом.
Материадьное обеспечение: серная кислота 0,1н, насыщенный раствор поташа (карбонат калия), содержимое рубца, чашки, индикатор Ташира (основной раствор — 40 мл 0,1 %-ного спиртового раствора метилового красного смешивают с 10 мл 0,1 %-ного спиртового раствора метиленового синего; рабочий раствор — к 2 мл основного раствора добавляют 2 мл спирта и 4 мл воды), 0,02 н. раствор едкого натра, 0,02 н. раствор серной кислоты.
Принцип метода основан на вытеснении аммиака щелочью из внешней камеры чашки Конвея и связывании его серной кислотой во внутренней камере. По количеству связанной кислоты рассчитывают концентрацию аммиака.
Ход анализа. В одну половину внешней камеры чашки Конвея вносят 1—2 мл жидкого содержимого рубца (после фильтрации через капроновую ткань), во вторую — 1—2 мл насыщенного раствора поташа (карбоната калия), а во внутреннюю камеру — 1 мл 0,1 н. раствора серной кислоты. В контрольную чашку вместо содержимого рубца вносят 1—2 мл дистиллированной воды. Чашки герметично закрывают стеклянными пластинками (парафиновые — подогретыми, стеклянные — с помощью вазелина), затем содержимое обеих половин внешней камеры смешивают легким покачиванием и оставляют при комнатной температуре на 12 ч. Открывают чашку осторожно при помощи скальпеля, после чего во внутреннюю камеру вносят 1—2 капли индикатора Ташира (основной раствор — 40 мл 0,1 %-ного спиртового раствора метилового красного смешивают с 10 мл 0,1 %-ного спиртового раствора метиленового синего; рабочий раствор — к 2 мл основного раствора добавляют 2 мл спирта и 4 мл воды) и титруют 0,02 н. раствором едкого натра. Индикатор Ташира в кислой среде имеет красную окраску, в щелочной — зеленую.
Концентрацию аммиака рассчитывают по формуле:
(а - в) 0,34К100 ,
X= C
где а — количество едкого натра, пошедшее на титрование к контрольной пробе, мл; в — количество едкого натра, пошедшее на титрование в исследуемой пробе, мл; 0,34 — количество аммиака, связывающегося 1 мл 0,02 н. раствора серной кислоты, мг; К — титр раствора едкого натра; 100 — в расчете на 100 мл; С — количество содержимого рубца, внесенное в чашку, мл.
. Тема: ОПРЕДЕЛЕНИЕ НИТРАТОВ И НИТРИТОВ В КОРМАХ
Цель занятия: освоить метод определения нитратов, нитритов в кормах.
Материадьное обеспечение: Приготовление реактива Грисса. Реактив Грисса состоит из двух растворов: 1) 0,5 г сульфани-ловой кислоты растворяют в 150 мл 12 %-ного раствора уксусной кислоты; 2) 0,1 г альфа-нафтиламина растворяют в 20 мл кипящей воды, фильтруют через бумажный фильтр и смешивают с 150 мл 12 %-ного раствора уксусной кислоты.
Растворы хранят на холоде отдельно в бутылках темного стекла. Перед применением их смешивают в равных объемах.
Прицип метода извлечение нитратов и нитритов из проб 2 %-ным раствором уксусной кислоты, на восстановлении нитратов до нитритов цинковой пылью и взаимодействии последних с реактивом Грисса.
Ход анализа. 10 г средней пробы измельченного корма заливают 200 мл 2 %-ного раствора уксусной кислоты и добавляют на кончике скальпеля порошок активированного угля. Смесь, периодически помешивая, настаивают при комнатной температуре в течение 1 ч, после чего фильтруют через простой бумажный фильтр.
Для определения нитритов в пробирку с 10 мл фильтрата вносят 0,5 мл реактива Грисса, а в контрольную 0,5 мл 12 %-ного раствора уксусной кислоты. После тщательного смешивания при наличии нитритов появляется розовое окрашивание, интенсивность которого определяют с помощью ФЭК-М через 15 мин при зеленом светофильтре (длина волны 536 мкм) в кюветах с шириной рабочих граней 10 мм против контрольной пробы.
Концентрацию нитритов определяют по заранее подготовленному калибровочному графику из стандартных растворов нитрита натрия, содержащих в 1 мл от 0,05 до 0,6 мкг NO2.
Для определения суммы нитратов и нитритов в пробирки (опытную и контрольную) с 6 мл фильтрата вносят по 2 мл 10 %-ного раствора уксусной кислоты и на кончике скальпеля цинковую пыль (1 г порошка металлического цинка тщательно в фарфоровой ступке смешивают с 10 г сульфата марганца). Пробирку встряхивают в течение 60 с, после чего вносят 1 мл реактива Грисса и перемешивают. В контрольную пробу вместо реактива Грисса вносят 1 мл 12 %-ного раствора уксусной кислоты. Интенсивность розовой окраски определяют так же, как и в случае с нитритами.
